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蛋白脱盐柱是一种方便的蛋白脱盐工具，只需离心操作即可用来对蛋白质液体样本进行脱盐，还可用于蛋白质、抗原、抗体、酶和微生物的浓缩纯化。也可以用来对蛋白质样品中的盐分、糖类、核酸、非水溶剂及其他一些低分子量物质进行去除和缓冲液置换。还可以用来分离蛋白质标记时未结合上的游离标记物。

蛋白脱盐柱使用蛋白质低吸附性的再生纤维素过滤膜制造，具有快速、方便、回收率高的特点，可替代并优于透析法脱盐及蛋白沉淀法蛋白浓缩。

• 脱盐和缓冲液更换；
  
• 组织培养提取物或细胞裂解液中大分子组分的纯化；
  
• 生物样品浓缩：包括各种抗原、抗体、酶、核酸或微生物；
  
• 对稀释或从柱洗脱液预先纯化的蛋白质进行浓缩。

• 高回收率：＞90%；
  
• 垂直结构的膜减少了浓差极化，加快离心速度，快达5分钟；
  
• 热密封膜将下游溶出物污染可能性降到最低；
  
• 100%完整性检测确保性能可靠；
  
• 透明外壳和体积刻度方便样品察看；
  
• 直接吸取样品减少处理步骤。

• 预实验很重要。必须要做预实验，在正式实验之前取少量样本优化实验条件，并像正式样本一样认真进行，看实验结果是否可行，实验条件是否适合自己的样本。由于生物样本的多样性，不同样本的实验条件通常差异较大，同种细胞的不同模型下需要的实验条件也可能不同，为了避免浪费正式样本和试剂，一定要提前预实验优化实验条件。
  
• 盐分通过滤膜的过程不依赖样品的浓度和体积，用过滤的方法来脱盐并不改变缓冲液的组成，比如说，含有500mM盐分的溶液在第一次离心后它的剩余液体盐浓度并不发生改变，依然是500mM。再往脱盐管中剩余溶液中加入水或无盐缓冲液，再次离心，则会降低溶液中的盐浓度。
  
• 这个过程我们将它称为等体积过滤，反复多次地操作，可以使溶液盐分降到最低。
  
• 如果我们想将样品用不同组份缓冲液溶解，则我们可以使用等体积过滤达到目的。样品脱盐后，然后加入目的缓冲液，再进行反复的稀释和脱盐。
  
• 不同的蛋白脱盐的速度不同，有的需要长时间离心，有的则很快就好。和蛋白样品纯度，所用buffer类型，蛋白的浓度有关系。离心时要先短些时间，观察一下脱盐速度；
  
• 如果需要多次重复使用，离心速度不要太高；
  
• 重复使用时要仔细检查管壁上有没有裂纹；
  
• 脱盐柱浓缩蛋白会有蛋白损失，样品体积大就分批离心，尽可能不要离心时间太长。
  
• 样品里的杂质如果可能尽量在离心前去除一些。
  
• 分子量小于5kD的溶质可能只有部分被截留。2kD的样品截留率大约只有40%。过滤膜的截留率取决于溶质的分子大小和形状。目的蛋白小于5kD的样品不要使用脱盐柱脱盐。
  
• 浓缩液的样本回收率低可能是由于吸附损失、过度浓缩，或样本穿过滤膜而造成的。
  
• 吸附损失取决于溶质浓度、疏水性、与过滤脱盐管表面接触的温度和时间、样本成分及pH。为了最大限度降低损失，离心后请立即回收脱盐后的样本。
  
• 如果样本的起始浓度很高，请监控离心过程，以免样本过度浓缩。过度浓缩会导致沉淀，这也可能带来样本损失。
  
• 样本有可能穿过滤膜，务必将每次的滤过液一直保留到脱盐的样品分析测试完成。
  
• 样品蛋白最低起始浓度为25μg/mL。
  
• 加蛋白液或Buffer到脱盐管时，可以用蓝枪头；但从脱盐管底吸取脱盐好的目的蛋白时，必须用黄枪头；用枪头伸入脱盐管中时，必须防止碰到滤膜，以免戳破滤膜。
  
• 离心机转速有相对离心力(RCF,×g)和每分钟转速(RPM)两种表示方式，有些离心机设置有RPM和×g显示切换，但部分离心机没有自动切换功能。需要用下面的公式进行换算：
  G=r×1.118×10^-5×rpm²(r为有效离心半径，即从离心机轴心到离心收集管底部中心位置的长度，单位为厘米)
  例如：转速为3000rpm，有效离心半径为10cm，则相对离心力(RCF,×g)为=10×1.118×10^-5×3000²=1006.2(×g)。

• 清洗脱盐柱：
  
  • 用缓冲液或纯水进行预清洗。也可先用0.1M NaOH清洗，再用缓冲液或纯水进行二次清洗。
    
  • 离心管中的过滤膜一旦润湿后应避免变干。如果在预清洗后不是立即使用，则让液体保留在滤膜上，直到使用。
• 脱盐操作步骤：
  
  • 将内管插入所提供的一个微量离心管中。
    
  • 向内管中加入不超过500μL的样本，并盖上盖子。
    注：如果样品体积小于过滤装置的最大体积，则可以把它稀释到最大体积后再离心，这有助于更有效地除去盐分。
    
  • 将盖好盖子的脱盐管放入离心转子中，让盖子的连接带朝着转子的中央；用一个类似的离心管平衡。
    
  • 以2000～10000×g离心约10～30分钟。
    注：
    ● 务必将滤过液一直保留到脱盐的样品分析测试完成。
    ● 影响流速的因素包括样本浓度、起始体积、溶质的化学性质、相对离心力、离心转子的角度、滤膜类型以及温度。500μL样本的典型离心时间大约是10至30分钟。尽管大部分样本在离心开始后的前5至10分钟发生过滤，但在离心10至30分钟后才能达到最低的浓缩液体积(15～20μL)。
    
  • 加入水或待更换缓冲液使样品体积达到0.5mL。
    
  • 再次离心。
    注：
    ● 务必将滤过液一直保留到脱盐的样品分析测试完成。
    ● 请将两次的滤过液一直保留到脱盐的样品分析测试完成。
    
  • 离心结束后将整个脱盐管从离心机中取出，取出内管。
    
  • 为了回收脱盐后的溶质，将内管倒过来插在另一个干净的微量离心管中。放在离心机中，让打开的盖子朝着转子的中央；用一个类似的离心管进行平衡。以1000×g离心2分钟，使脱盐后的样本从脱盐内管转移到收集管中。滤液可以保存在收集管中。
    注：
    ● 要达到理想的回收效果，请尽早进行倒置离心。
    ● 也可不倒置离心，直接用移液器直接吸出内管中的样品。
• 清洗和保存：
  
  • 使用后用水冲洗干净；
    
  • 内管加入超纯水500μL，5000×g离心5分钟；
    
  • 净内管中的水，加入500μL 0.1M NaOH，5000×g离心20分钟；
    
  • 用0.1M NaOH浸泡24小时；
    
  • 用水冲洗干净；
    
  • 用无菌水浸泡2～8℃保存。
    
  • 外管用自来水洗净后，用超纯水冲洗干净，晾干。
    注：
    ● 1个月不用的话，直接用100mM的NaOH保存！更长时间的话加0.02%叠氮钠。
    ● 再次使用前，用纯水充分冲洗干净，然后在用样品缓冲液平衡。

• 蛋白脱盐柱会损失蛋白吗？
  分子量小于3000 Da的蛋白质或多肽样品会穿透过滤膜，不适合用本脱盐柱进行脱盐。3000-6000Da的蛋白质会有少量损失。6000Da以上的蛋白质损失很小。
  
• 膜会因为离心时间过长而变干么？
  不会，因为脱盐柱有死体积，总会有溶液残留在滤管中。死体积大约10～20μL。
  
• 可以重复使用脱盐柱么？
  可以重复使用。如果使用、清洗、保存得当，可以反复使用多次。但是多次重复使用后过滤膜有破损风险，注意使用过程中尽量避免尖锐物品戳到膜。离心力不要过大。
  
• 蛋白在脱盐时出现了沉淀，如何改进？
  蛋白如果脱盐过快或过度浓缩都有可能引起蛋白沉淀。建议蛋白脱盐后的最终浓度不超过20mg/mL。对于对脱盐速度敏感而容易沉淀的蛋白，建议的改进方法是：
  • 离心力降低30%～50%
    
  • 在脱盐过程中取出脱盐管，用枪头反复吹吸几次。
• 脱盐后发现浓缩液中没有目的蛋白，可能的原因有哪些？
  脱盐管的蛋白最低起始浓度为25μg/mL。请确保样本的起始浓度大于这个浓度。
  如果问题仍然出现，请不要丢弃样本滤过液以便用于分析可能的原因：
  • 如果目的样本在滤过液中，那么请排查：
    • 使用的离心力是否是在限定范围内？如果使用的是rpm，请换算成相应的g离心力，具体换算方法请垂询。
      
    • 离心机最近是否有校准过？
      
    • 是否首次尝试这个蛋白？如果能确保用同样的脱盐管对其它蛋白成功操作的话，那么有可能是这个目的蛋白的原因。有时蛋白会因其本身的一些特性(构象差异)而影响脱盐效果。
  • 如果目的样本也不在滤过液中，那么：
    • 蛋白样本起始浓度是否大于25μg/mL？
      
    • 用来确定样本浓度的方法是什么？是否可信？
      
    • 目的蛋白是不是沉淀了？
• 有时候用蛋白脱盐离心管连水都离不下来，可能是什么原因？
  如果出现这种情况，可能时过滤膜的孔被堵住。请先用0.1M NaOH清洗再离心。
  最后用缓冲液或纯水再次清洗后甩干。清洗后的滤膜应立即使用，如暂时不用，请保持润湿状态，避免重新干燥。
  
• 推荐在室温下进行离心，考虑到蛋白的稳定性，是否可以在4℃进行离心？
  可以，但是低温会增加蛋白样品的粘性，导致流速减慢，建议可将离心时间延长。
  
• 可以用于核苷酸纯化与浓缩么？
  可以
  
• 脱盐柱可以用酒精消毒灭菌么？
  脱盐柱与70%乙醇是兼容的。
  
• 是否可以用于高压灭菌？
  不可以，脱盐柱都是采用热封设计，不可以用高压高温灭菌。
  
• 是否无热源？
  均非无热源的
  
• 如何对蛋白脱盐管进行去除内毒素的处理？
  提供的脱盐管是没有经过去内毒素处理的，同时由于内毒素通常以多聚体的形式存在，大小在10～1000KD之间不等，在脱盐的过程中是无法去除的。可在实验前通过先用0.5M NaOH预清洗，随后用纯水/缓冲液buffer清洗的步骤去除大部分内毒素。
  
• 是否不含RNA酶？
  我们不保证脱盐柱不包含RNA酶，如果需要处理无Rnase样品，建议您可以用0.1% DEPC在37℃浸泡2小时，以完全灭活RNA酶。残留的DEPC可以用无酶超纯水洗涤除去。
  
• 没有液流流出，为什么？
  可能是溶液比较粘稠或浓度太高；
  
• 蛋白柱去除去垢剂吗？
  去垢剂因其独特的性质，当浓度大于临界微团浓度(Critical Micelle Concentration,CMC)时，去垢剂分子会聚集形成微团而改变分子构象，这有可能会影响去污剂的去除效果。小于CMC值时可以去除。
  
• 如何判断脱盐管已经失效？
  在正常使用下，滤膜没有被戳破时，脱盐蛋白液中不含有蛋白或量很低(包括目的蛋白)，而第一次的滤下液中含有目的蛋白，则说明滤膜失效，需要换新的脱盐管。